前花青素的測(cè)定方法

鑒定： 
1. 顏色反應(yīng)：反應(yīng)后顏色為深紅色。將50mg的樣品溶于1ml濃鹽酸和4ml乙醇的混合溶液中，然后加熱，直到混合溶液的顏色變?yōu)樯罴t色為止。 
2. 薄層色譜法：吸附劑：硅膠60F251展開(kāi)劑：乙酸乙酯：甲酸：水=18：1：1（體積比）顯色：將磷酸和乙醇按（1：1）的體積比混合，再加入1%的香草醛，噴霧薄層板，加熱1分鐘，只出現(xiàn)前花青素的紅色斑點(diǎn)，繼續(xù)加熱15分鐘后，各種單體全部顯色。樣品：將樣品配成25mg/mg的甲醇溶液，取5μl點(diǎn)于薄層板上。薄層色譜柱和檢測(cè)器，所得到的信號(hào)-時(shí)間曲線，又稱色譜流出曲線(elution profile)>色譜圖譜 
Rf 0.62 兒茶素 
0.55 前花青素二聚體 
0.41 前花青素二聚體 
0.34 前花青素三聚體 
0.26 前花青素四聚體 
0－0.2 前花青素寡聚體前花青素含量（Porter 試驗(yàn)）

一、原理：前花青素是含有兒茶素和表兒茶素單元的分子，它氧化水解后能夠生成紅色的花青素離子。前花青素本身沒(méi)有顏色，但是經(jīng)過(guò)用熱酸處理后，可以生成深紅色的花青素離子。Porter試驗(yàn)?zāi)軌蚨繙y(cè)定前花青素在水解過(guò)程中生成的花青素離子。

二、方法：試劑：甲醇 正丁醇 鹽酸 NH4Fe（SO4）2·12H2O儀器：分光光度計(jì)。將10mg樣品溶于10ml甲醇中。取上述樣品溶液1ml，用甲醇稀釋至10ml為待測(cè)檢液。將正丁醇與38%的鹽酸按照95：5的體積比混合后，取出6ml；將NH4Fe（SO4）2·12H2O用濃度為2mol/L的鹽酸按照2%（W/V）的比例配制，取出0.2ml，連同前面的6ml一同加到1ml待測(cè)檢液中，在加蓋密封的玻璃容器中（離心管）用沸水浴加熱40分鐘。如果對(duì)加蓋的試管進(jìn)行加熱有麻煩的話，可以在沸水浴加熱回流。加熱40分鐘后，立即用冰水冷卻試管。在加熱完畢后15分鐘，于546nm處測(cè)吸光度。前花青素所戰(zhàn)百分素= 
0.01389－反應(yīng)混合物中樣品的濃度 mg/ml。 
0.366－A1%1cm在546nm處前花青素的吸光度。